大鼠脂多糖結合蛋白試劑盒檢測靈敏度高,特異性強,重復性好,采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣品中大鼠LBP的濃度。大鼠LBP特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上,當加入標準品或樣品時,其中的大鼠LBP會與捕獲抗體結合。當加入辣根過氧化物酶標記大鼠LBP抗體后,辣根過氧化物酶標記大鼠LBP抗體與大鼠LBP結合,形成夾心的免疫復合物。
加入顯色劑TMB溶液,固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質,在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現定量檢測。大鼠LBP濃度與A450值呈正比,通過繪制標準曲線,對照樣品吸光度值,即可計算出樣品中大鼠LBP濃度。
大鼠脂多糖結合蛋白試劑盒樣品收集:
1、血清:全血樣品于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,收集血液的試管應為一次性的無熱原,無內試管;
2、血漿:抗凝劑推薦使用EDTA-Na2,樣品采集后30分鐘內于1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測。避免使用溶血,高血脂樣品;
3、組織勻漿:用預冷的PBS(0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測;
4、細胞培養上清:取細胞培養上清于1000×g離心20分鐘,除去雜質及細胞碎片。取上清檢測;
5、其它生物樣品:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測;
6、樣品應清澈透明,懸浮物應離心去除;
7、樣品收集后若在1周內進行檢測的可保存于4℃,若不能及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個月內檢測),或-80℃,避免反復凍融;
8、如果您的樣品中檢測物濃度高于標準品較高值,請根據實際情況,做適當倍數稀釋。